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プラスミドのコンストラクションについてです。初めて質問させていただく修士学生で、半年近くうまくいかず、修論が書けないような状態です。研究室の構成上、先輩はおらず、先生も同じ操作を行ってもうまくいきません。 目的とするプラスミドが作成できません。Kpn1とXho1サイトを付加した3.2 kbの配列をpGEM T EASYベクターにTAクローニングし、pGL4.10または3 Basicにサブクローニングを行っていますが、トランスフォーメーション後、コロニーは生え、使用ベクターより高いプラスミドが得られるのですが、PCRおよび制限酵素処理の結果から目的としているものではありません。 具体的に、ベクターとインサートをKpn1とXho1で処理後、ベクターはホスファターゼ処理を、インサートはpGEMが3.0 kbでありインサートと近いことからカラム精製を行いSca1でpGEM部分を消化後、両者ともゲル精製を行い、エタ沈後インサート200 ng、ベクター50 ngでMightymixでライゲーションを行い、トランスフォーメーションを行っています。精製キットはWizard SV Gel purification Kitを使用しています。またライゲーション前の濃度測定の他、電気泳動によりインサートとベクターが切断されていることおよび目的の分子量であることは確認している上、切り出しのUVは長波長を用い、最小限の時間で行っています。 全てのキットや酵素は新品に変えました。また結果として、コロニーは30-100(場合によりまちまち)、ネガティブは多くても10程度生え(生えないか生えても3個ほどが多い)、30-100生えたコロニーはMiniprepの結果uncutと、目的のものが入ったかと思われたものの2パターンありますが、制限酵素でインサートが切れません。制限酵素処理の組成は多くためしましたが全く切れません。またベクターの両端からのPCRの結果からも、目的産物が入っているとは考えにくいです。何かが誤って入ったにしろ制限酵素で切れるはずと思うのですが切れない上、ゲル精製を行っていることからも他のものが入ることはないような気がします。ベクターのMCSとインサートの配列はダイレクトシークエンシングで確認済みです。この不可解な結果は何度も再現性がとれております。何がどうなっているのか全くわかりません。外注を考えなければいけないのかと思うくらいです。コンピはJM109を使用しています。上記全ての試薬類は全て新品および正常に機能することを確認してあります。もう頼るところがここしかなく、神に祈る気持ちで質問させていただいたほどの心境です。どなたか答えていただけたら、心から幸いです。

プラスミドのコンストラクションについてです。初めて質問させていただく修士学生で、半年近くうまくいかず、修論が書けないような状態です。研究室の構成上、先輩はおらず、先生も同じ操作を行ってもうまくいきません。 目的とするプラスミドが作成できません。Kpn1とXho1サイトを付加した3.2 kbの配列をpGEM T EASYベクターにTAクローニングし、pGL4.10または3 Basicにサブクローニングを行っていますが、トランスフォーメーション後、コロニーは生え、使用ベクターより高いプラスミドが得られるのですが、PCRおよび制限酵素処理の結果から目的としているものではありません。 具体的に、ベクターとインサートをKpn1とXho1で処理後、ベクターはホスファターゼ処理を、インサートはpGEMが3.0 kbでありインサートと近いことからカラム精製を行いSca1でpGEM部分を消化後、両者ともゲル精製を行い、エタ沈後インサート200 ng、ベクター50 ngでMightymixでライゲーションを行い、トランスフォーメーションを行っています。精製キットはWizard SV Gel purification Kitを使用しています。またライゲーション前の濃度測定の他、電気泳動によりインサートとベクターが切断されていることおよび目的の分子量であることは確認している上、切り出しのUVは長波長を用い、最小限の時間で行っています。 全てのキットや酵素は新品に変えました。また結果として、コロニーは30-100(場合によりまちまち)、ネガティブは多くても10程度生え(生えないか生えても3個ほどが多い)、30-100生えたコロニーはMiniprepの結果uncutと、目的のものが入ったかと思われたものの2パターンありますが、制限酵素でインサートが切れません。制限酵素処理の組成は多くためしましたが全く切れません。またベクターの両端からのPCRの結果からも、目的産物が入っているとは考えにくいです。何かが誤って入ったにしろ制限酵素で切れるはずと思うのですが切れない上、ゲル精製を行っていることからも他のものが入ることはないような気がします。ベクターのMCSとインサートの配列はダイレクトシークエンシングで確認済みです。この不可解な結果は何度も再現性がとれております。何がどうなっているのか全くわかりません。外注を考えなければいけないのかと思うくらいです。コンピはJM109を使用しています。上記全ての試薬類は全て新品および正常に機能することを確認してあります。もう頼るところがここしかなく、神に祈る気持ちで質問させていただいたほどの心境です。どなたか答えていただけたら、心から幸いです。

アジアや中東の日常生活について分かる本を探しています。 アジアや中東に住む人の衣食住などについて詳しく記載されている本を探しています。 観光のガイドや、産業の紹介のようなものではなく、その地域の田舎とか郊外に住んでいるような人々の仕事や食事、娯楽や家の中の様子などが分かるものでおススメがあれば教えてください。 学術的に研究したいわけではなく、単にこれらの地域の人々がどんな暮らしをしているかに興味があるだけなので、田舎の風景や市民の普段の生活を写した、写真集のようなライトなものだとなお嬉しいです。

プラスミドのコンストラクションについてです。初めて質問させていただく修士学生で、半年近くうまくいかず、修論が書けないような状態です。研究室の構成上、先輩はおらず、先生も同じ操作を行ってもうまくいきません。 目的とするプラスミドが作成できません。Kpn1とXho1サイトを付加した3.2 kbの配列をpGEM T EASYベクターにTAクローニングし、pGL4.10または3 Basicにサブクローニングを行っていますが、トランスフォーメーション後、コロニーは生え、使用ベクターより高いプラスミドが得られるのですが、PCRおよび制限酵素処理の結果から目的としているものではありません。 具体的に、ベクターとインサートをKpn1とXho1で処理後、ベクターはホスファターゼ処理を、インサートはpGEMが3.0 kbでありインサートと近いことからカラム精製を行いSca1でpGEM部分を消化後、両者ともゲル精製を行い、エタ沈後インサート200 ng、ベクター50 ngでMightymixでライゲーションを行い、トランスフォーメーションを行っています。精製キットはWizard SV Gel purification Kitを使用しています。またライゲーション前の濃度測定の他、電気泳動によりインサートとベクターが切断されていることおよび目的の分子量であることは確認している上、切り出しのUVは長波長を用い、最小限の時間で行っています。 全てのキットや酵素は新品に変えました。また結果として、コロニーは30-100(場合によりまちまち)、ネガティブは多くても10程度生え(生えないか生えても3個ほどが多い)、30-100生えたコロニーはMiniprepの結果uncutと、目的のものが入ったかと思われたものの2パターンありますが、制限酵素でインサートが切れません。制限酵素処理の組成は多くためしましたが全く切れません。またベクターの両端からのPCRの結果からも、目的産物が入っているとは考えにくいです。何かが誤って入ったにしろ制限酵素で切れるはずと思うのですが切れない上、ゲル精製を行っていることからも他のものが入ることはないような気がします。ベクターのMCSとインサートの配列はダイレクトシークエンシングで確認済みです。この不可解な結果は何度も再現性がとれております。何がどうなっているのか全くわかりません。外注を考えなければいけないのかと思うくらいです。コンピはJM109を使用しています。上記全ての試薬類は全て新品および正常に機能することを確認してあります。もう頼るところがここしかなく、神に祈る気持ちで質問させていただいたほどの心境です。どなたか答えていただけたら、心から幸いです。

「医師です」「獣医師です」と名乗った回答について。 悩んでいる質問者にとって、専門家からの回答は大変心強いものです。 でも、あたりまえですが本当に医師や獣医師かどうか、このサイトではわかりませんよね。 このサイトを利用する人ならば、基本的に「知らない人が答えているから、信憑性は自己判断すべきだ」「あくまでお隣のお知恵拝借サイトだ」という前提を持った上で質問すべきです。 でも、真剣に切羽詰っている人ほど、藁にもすがりたい思いで冷静さを欠いている事が多いです。 特に健康に関する質問では。 たとえ間違った答えでも、「医師です」と書いてそれっぽい答えをしたら、熱心に答えを求めている質問者はうっかり信じてしまうと思います。 そして「専門家から答えをもらった」という事で診断されたような気になり安心し、病院へ行ったほうがいい症状でも行かなくなってしまうような事が起こり、大変危険なのではないでしょうか。 実際、獣医師を名乗る回答者から「大丈夫だから安心しなさい」と回答され「しばらく様子を見てみます☆」と答えている質問者がいました。しばらく後、同じ質問者が「愛犬が〇〇でもう・・・」とやっぱり病気だったのでアドバイスがほしいと新しい質問を書き込んでいました。 何を信じて行動するにしても質問者の責任だから、質問者さんの判断の結果でしかたないと思う一方で、「獣医師です」の一言が無ければ、質問者も「大丈夫」との答えを可能性の一つとして他の回答と平等に判断し検討できたのではないか、また早く病院に連れて行く選択肢が奪われなかったかもしれないと思うと、同情を禁じえません。犬かわいそ。 本当の獣医師、医師、看護師その他専門家からの回答は、本当に有益ですが、診断に準ずるような回答は慎重になってほしいです。正直そういう回答なら避けて受診を促した方がいいと思うし、診断が必要なさそうな(ご近所の知恵袋的な)相談や質問への回答なら、あえて専門家と名乗らなくても支障は無いのではないでしょうか。 ちなみに、普通無資格者が医師や獣医師を名乗ると、それだけで罰金なのですが、このサイトでは資格があるかどうかそもそも判断が出来ないので、無資格者が医師を名乗っても罰金にもなりません。また、医者や獣医の診断には、当然責任が伴いますが、匿名サイト上での自称医者の診断には責任が伴いません。だから、医師を名乗って好き勝手言える上に、ペナルティや誤診のリスクも負わない、という状況です。 本当に医者の人が医者を名乗るのには「いい加減な素人より私を信じなさい」という意図もあるのでしょうが、無資格者でも成りすまして答えられる以上、健康や医療関連の回答では、回答閲覧者・質問者への影響力を考えると、名乗るメリットより名乗る事による危険の方が大きいのでは、と思うのですが、皆さんいかが思われるでしょうか。 ＊一応、医師を名乗って薬の飲み方などのアドバイスはすでに禁止のようですが、個人的には診断とも取れるような回答については、医師を名乗る事までも禁止にして良いくらいじゃないかと思ってます。

アンファニーハーダウェイは今現在どうしているか知ってる方教えて下さい! 2007年以降の情報がないので‥

彼女が二重に整形してたらどうします??

自分をもつとは、どういう事ですか？ 私は、３０歳になりますが、自分をもつという意味がいまいち よく分かりません。 多分、自分をもつということを知らないから、まったくの未知の世界なので どうすれば、自分をもっているということになるのかが分かりません。 私は、すぐ人の言いなりになってしまうところがあると思います。 いつも人にまわされているような気がします。 悪く言うと会う人会う人に、なめられています。 長所は、素直。きつい部分が一切ないところ。 これは、長所になるのか分からないけど、計算ができない。（１＋１＝２ではなくて、計算高い女になれないという意味。） でも、これでは、生きていけないと思い、質問しました。 人って、きつい部分がない人間には、つけ上がるときがありますね。 以前、知人に、「私って、なんでみんなになめられるの？」と、相談したところ 「それは、自分をもってないからだ」といわれました。 どうすれば、自分をもつことが、できますか？

セックス依存症かもしれない彼との結婚 お付き合いをしている彼は現在４０歳、私はミドル３０。 お付き合いを始めてまだ２ヶ月ちょっとですが、お互い良い年なので結婚前提でお付き合いを始め、 お互いの家が近く容易に行き来出来ることもあり、合鍵を持ち合いほぼ毎日どちらかの家で一緒に過ごしています。 彼は４０歳ですが毎日セックスをします。 週の半分は朝と晩にです。 最初は嬉しかったのですが、だんだんそのことを負担に感じるようになってしまいました。 彼のことは好きですし、毎日一緒にいたい、会いたいと思うのですが、 遅い時間に疲れて帰って、そのままゆっくり寝たい日もあります。 そういう時に帰ってからのセックスのことを考えると憂鬱になってしまいます。 お互い忙しくそもそもの睡眠時間が４時間ほどしかありません。 特に朝は、出来るだけ寝ていたい、短い時間で早く身支度をして仕事に行く準備をしたい、 朝Hをすると一日がだるい、などの理由で私はあまり好みません。 一度私があまりしたくない素振りを見せたところ、彼はとても怒り、気分を害してしまったようで、 以来、怖くて拒否出来なくなりました。 お付き合いを始めたばかりのカップルだったら毎日でもおかしくはないと思うのですが、 ２ヶ月を過ぎても変わらないのと、彼の年齢、私の嫌な素振りを異常に怒った彼のことをかんがみると、 彼はセックス依存症なのでは？という考えが浮かんでしまいます。 彼よりも私の帰りが遅い時は一人でもしているようです。 ４０歳前後の男性の性欲とは、人それぞれだとは思いますが、こんなに旺盛でも普通の範囲でしょうか。 セックス依存症というものは、直るものなのでしょうか。 （たしかタイガーウッズはカウンセリングを受けたそうですが、、、） ちなみに彼はかなり仕事が出来る人で、その仕事はとてもストレスフルなもののようです。 そのストレスとも関係があるのかもしれません。 結婚を考えていることと、既婚者の方々のご意見をお聞きしたく、夫婦・家族カテでに投稿させていただきました。 どうぞよろしくお願いいたします。

「医師です」「獣医師です」と名乗った回答について。 悩んでいる質問者にとって、専門家からの回答は大変心強いものです。 でも、あたりまえですが本当に医師や獣医師かどうか、このサイトではわかりませんよね。 このサイトを利用する人ならば、基本的に「知らない人が答えているから、信憑性は自己判断すべきだ」「あくまでお隣のお知恵拝借サイトだ」という前提を持った上で質問すべきです。 でも、真剣に切羽詰っている人ほど、藁にもすがりたい思いで冷静さを欠いている事が多いです。 特に健康に関する質問では。 たとえ間違った答えでも、「医師です」と書いてそれっぽい答えをしたら、熱心に答えを求めている質問者はうっかり信じてしまうと思います。 そして「専門家から答えをもらった」という事で診断されたような気になり安心し、病院へ行ったほうがいい症状でも行かなくなってしまうような事が起こり、大変危険なのではないでしょうか。 実際、獣医師を名乗る回答者から「大丈夫だから安心しなさい」と回答され「しばらく様子を見てみます☆」と答えている質問者がいました。しばらく後、同じ質問者が「愛犬が〇〇でもう・・・」とやっぱり病気だったのでアドバイスがほしいと新しい質問を書き込んでいました。 何を信じて行動するにしても質問者の責任だから、質問者さんの判断の結果でしかたないと思う一方で、「獣医師です」の一言が無ければ、質問者も「大丈夫」との答えを可能性の一つとして他の回答と平等に判断し検討できたのではないか、また早く病院に連れて行く選択肢が奪われなかったかもしれないと思うと、同情を禁じえません。犬かわいそ。 本当の獣医師、医師、看護師その他専門家からの回答は、本当に有益ですが、診断に準ずるような回答は慎重になってほしいです。正直そういう回答なら避けて受診を促した方がいいと思うし、診断が必要なさそうな(ご近所の知恵袋的な)相談や質問への回答なら、あえて専門家と名乗らなくても支障は無いのではないでしょうか。 ちなみに、普通無資格者が医師や獣医師を名乗ると、それだけで罰金なのですが、このサイトでは資格があるかどうかそもそも判断が出来ないので、無資格者が医師を名乗っても罰金にもなりません。また、医者や獣医の診断には、当然責任が伴いますが、匿名サイト上での自称医者の診断には責任が伴いません。だから、医師を名乗って好き勝手言える上に、ペナルティや誤診のリスクも負わない、という状況です。 本当に医者の人が医者を名乗るのには「いい加減な素人より私を信じなさい」という意図もあるのでしょうが、無資格者でも成りすまして答えられる以上、健康や医療関連の回答では、回答閲覧者・質問者への影響力を考えると、名乗るメリットより名乗る事による危険の方が大きいのでは、と思うのですが、皆さんいかが思われるでしょうか。 ＊一応、医師を名乗って薬の飲み方などのアドバイスはすでに禁止のようですが、個人的には診断とも取れるような回答については、医師を名乗る事までも禁止にして良いくらいじゃないかと思ってます。

私はいわゆるちょっと変な人です。 でも誰よりも欲張りだし、普通になりたい そしてなるべく誰からも好かれたい。 客観的な意見がたくさんほしいのですが 自分は頭が弱いので自分だけだと偏った考えに陥り気味です どうすればよいのか。 職場の人や友人はオブラートに包んだり、素直に言ってくれない。 親も甘い目線でしか見てくれない。 どうしても冷静な客観視がほしいのですが どうすればよいのかわからないです。 私はどうしても自分を改善していきたいのです

私は変わり者でしょうか？ 私は何でも他の人と違う物を買う傾向があります。 それは値段に関係なくで、とにかく定番品や売れ筋商品は他人と被ることが多いからです。 特に値段がある程度する車や腕時計は、知名度や人気は全く気にしません。 なぜなら、折角大金はたいて自分の趣味に合わない定番品や売れ筋を気にすることが嫌だからです。 しかし、定番品や売れ筋を全く否定するつもりはないのですが、同僚からは「変わり者」と言われています。 やはり私は変わり者でしょうか？

論文はどこで探せば見れるのですか？ 大学生なのですが、CINIIというサイトで論文を検索しています。しかし、CINII内で本文を閲覧できるものには「紀要」であったり「報告書」であったり「概集」という言葉が付記されています。これらは、論文を要約したようなもので、これらを読んでも論文を読んだということにはならないのでしょうか？ また、論文の本文を読むためにはどのゆに検索、もしくはどこに出向けばいいのでしょうか？

彼女が二重に整形してたらどうします??

完璧な夫・男をしているつもりですが・・・ 結婚5年　就学前の2人の子持ちアラフォー夫婦です。 最近、妻からの愛情が希薄になってきている気がします。 （以前はうるさいほどスキスキ言われていました。） Hも半年以上していません。 どうしてだと思われますか？ なにが足りないと思いますか？ 私は夫として、男として理想的だと思っているのですが・・・ （理由） ・それなりにかっこいい（妻からのアプローチで結婚） ・それなりにおもしろい ・それなりにやさしい ・それなりに高収入（年収1000万以上） ・倹約家（でも使うときには使う） ・酒は飲むがほとんど宅飲み ・それなりに頼りになる ・床上手（必ず逝かせる） ・子煩悩（土日は終日遊び相手） ・家庭中心主義（寄り道せず8時位には帰宅） ・料理上手（休みの日には料理をしてあげる） ・家事もこなす（自分の夕食の片付けは自分でする） ・DIYや庭の手入れもやる ・スポーツマン（筋肉質） ・実家がうるさくない ・妻実家の割と近くに家を建てた（私の実家からは遠い） などなど 簡単で結構ですのでコメントをよろしくお願いいたします。

美人は何故得をするのか 韓国映画「カンナさん大成功です！」を観ました。 主人公のカンナは音楽的才能のある歌の上手い女の子ですが ルックスが悪いために 他のスタイルのよい美人歌手（でも歌はド下手）のゴーストシンガーを務めている。 そんな彼女はある事がきっかけで全身整形をして表舞台に立つようになる・・というお話です。　 整形してスタイルと顔を変えたカンナは 途端に周囲の男性達にちやほやされるようになります。 男性達は「顔が美しい」というだけで無条件にカンナに惹かれます。 以前のカンナは器量が悪いと言うだけで （人より抜きんでた才能があっても） 男性達にバカにされまくっていた。 もちろん映画なのでおもしろおかしく描いている部分はあると思いますが・・ 容姿が悪いとそれだけで侮蔑の対象になってしまうのは何故なのでしょう？ （ここでは「性格の善し悪し」は脇に置いておきますが） どうして人間は「容姿が美しい」と その人に（一定の）価値があると感じるのでしょうか？ 一般人１００人の顔を平均化すると 整った顔になると聞いた事があります。 それと何か関係があるのでしょうか。

ビザについて質問です。来月から初海外生活（アメリカ）予定です。 夫はJ1で、私はJ2で申請します。 渡米後、一ヶ月後くらいして生活できる環境が整ったら私だけ日本に帰り、３ヶ月ほど日本に居て、再び渡米しその後はアメリカに夫と２年間滞在します。 その場合、ビザはまた同じように申請しなくてはいけないですか？色々見たのですが、よく分からずしかし期日は迫ってきているので、どうかアドバイスなどお願いします（＞＜；）

進学校に入学した息子、中学のころから口数が多いというほうではありませんが、高校に入ってからいっそう口をきかなくなりました。運動部に入り、成績も上位ですが、ほかの学校生活の情報があまり分かりません。男子高校生はこうですか?家庭でも快活に送っているという友人の子の話などきくと、うちは問題あり?と不安になってしまいます。食生活は普通で、後片付けもしていきますが、とにかく口をききません。

外国人と結婚する姉に両親が猛反対 昨日姉が外国人と結婚をしたいと家族に告げましたが、両親は外国人だからと大反対です。私自身は賛成なのですが、両親にはどのように説得すればわかってくれるでしょうか？

自分は研修医1年目の医師ですが、医学にあまり興味はありません。 もともと大学受験のとき、得意分野は世界史や文学などの文系科目でした。これらの分野は今でも大好きで、歴史・哲学の本やドストエフスキーなど、一日中眺めていても飽きないほどです。 しかし、経済的にまずは食いはぐれないように、と親の命令で医学部を受験せざるを得ませんでした。 医師として、本当に自立して診療アルバイトなどで食うに困らなくなったら、文系の道に転向したいと思っています。 できたら本格的に中世ヨーロッパのキリスト教史などを勉強して、その道の研究者として名を上げたい ・知識を蓄えて歴史小説作家になりたい・・・などの野望はあります。 そこで文系大学院の方などにお聞きしたいのですが、 (1)30過ぎくらいから文系大学に入りなおしても、研究者になる道は残されているでしょうか？ 年齢的にちょっと苦しいものを感じていますが・・・ (2)皆様、修士・博士課程を終えてからどのような道に進まれるのでしょうか？ ポスドク、という言葉を聴いたことはありますが。