細胞関連の分析でお詳しい方お願いします。

質問

私は現在、大学の研究で、
「細胞内に化合物を導入し、その化合物が細胞内でどういった挙動を示すか」について検討しています。

私の研究室は有機化学や合成化学が専門なので、
こういった細胞を扱う研究は私が研究室では第一人者です。
ほとんどノウハウのない状態でここまで続けてきました。

化合物は本来、細胞膜を透過しないのですが、なんとか細胞内に入れ込むことに成功し、
その化合物を取り出すことも達成しました。
化合物は構造を維持されており、実験方法は確立しつつあります。

しかし、細胞内に導入できる「量」というものがとても微量で、
細胞溶解液から化合物の状態を分析したいのですが、細胞の内容物に埋もれてしまって容易に確認できません。UV-visで分析していますが、ピークが小さすぎてノイズで隠れてしまうのです。
細胞内導入の方法はたくさんありますが、色々試した結果、唯一といってよいほど簡便で優れた方法が現行の方法です。

導入量は増やせないという問題を抱えながら、目的を達成するにはどんな工夫ができるでしょうか？
私は、
大型のウェルに大量に細胞を培養→化合物を導入後、回収→細胞溶解し、精製→濃縮し、分析
という方法が見込みがあると考えています。
どうでしょうか？

どうしても考え方が化学なので、生物専門の方の意見が聞きたく質問させていただきました。
お願い致します。

回答No.1

ga111 · ベストアンサー

いわゆる、ドラッグデリバリーですね。

細胞内には、一般の変わった化合物はかなり微量しか入っていかないですよね。スケールアップするのなら、30ｃｍとかのシャーレとかをつかいます。

検出には、いろいろ過激な処理をした後、主にHPLCを使うと思います。UV-visだと、、、大丈夫ですか？？

お分かりとは思いますが、生物系では、インプットしたものを取り出すよりは細胞がその化合物でどのような反応を示すかが一番の興味の対象で、その化合物が、そのままであろうが、修飾されようが、それは、２の次、３の次になります。

お礼

ありがとうございます。
おっしゃる通り、導入した後に細胞内のタンパク質の活性を見ます。
それはある程度達成しており、その要因を化学的に検討しています。

大まかには化合物が細胞内の物質を補足したか否かを知りたい・・・ってところです。
UVを使うのは、化合物の補足有無がUVスペクトルで明瞭に判別が付くからです。

３０ｃｍシャーレはすぐ用意できませんが、普通のシャーレを何枚か用意してやってみたいと思います。

回答No.2

kgu-2

単に感度をあげるのなら、常識。
1)化合物なら、ラジオアイソトープを使う。これは常識です。
2)可能なら、蛍光物質を利用。
3)あとは、抗体、なんぞの変則技もありですが、おそらく無理。
4)検出の問題なら、MASSで測定

　このアドバイスでうまく行った場合は、当然「謝辞」を述べてくれますよね。それは、科学者としてのマナーです。

お礼

ありがとうございます。
化合物というのはマンガンの金属錯体でして、細胞内の物質を補足（メタルに配位させることで補足）したかどうかを確認します。
かなり完成された錯体であること、蛍光が出ないこと、TOF－MSであればレーザーで切れるため検出できません。ESIならいけましょうか・・・