DNAの分子量の出し方について

質問

ＰＣＲ産物のマーカーＤＮＡ断片による分子量測定について質問です。
現在研究においてＨＰＶ遺伝子の検出を行っています。
組織片からＤＮＡを抽出→ＰＣＲで増幅→電気泳動→エチジウムブロマイドで染色→ＵＶ照射→バンドを確認→写真をプリントといった手順で行いました。
その後、写真を用いてマーカーＤＮＡ断片とＰＣＲ産物の移動度を定規を用いて計り、片対数グラフを用いてＰＣＲ産物の分子量測定を行ったのですが、手書きで行ったため思ったような結果が得られませんでした。
いいグラフの書き方又はグラフでの分子量の測定以外の求め方を御存知の方がいましたら回答よろしくお願いします。

回答No.1

ice_rif

グラフが手書きか解析ソフトでやったかの問題
ではないと思います。以下の点は実行してますか。

１．ＤＮＡサイズに最適のゲル濃度にする。

２．ＤＮＡ量を適度にし、マーカーと試料の
塩濃度をそろえる。

３．マーカーＤＮＡに、ＰＣＲ産物の大きさに
あった１ｋｂあるいは１００ｂ ladderを用る。

お礼

回答ありがとうございます。
１、２、３の点に関しては実行できていると思っています。 文献の手順どおりに調整し、実験しました。
バンド確認の結果、マーカーＤＮＡとＰＣＲ産物を比べると目的のものは増幅できていると思っていましたが、初めての実験だったので、気がつかないところで失敗していたのかもしれません。もう一度実験手順その他を確認してみます。
返信遅くなって申し訳ありません、ありがとうございました。