kuoyang100のプロフィール
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- 登録日2006/05/07
- 免疫染色でシグナルが出ない。。
2種類の別の抗原を認識する抗体で、卵巣を凍結して免疫染色を行いましたが、シグナルがみられません。。 -80℃の2-メチルブタノールで凍結後、切片を作製、アセトン固定後免染を行いました。 免染自体は、みな同じプロトコールなので問題ないと思います。 論文を参考に新しく抗体を買った(その論文では製造会社までしか指定がなく、型番までは不明)ので、失活していることはないはずです。 ただ、論文に書いてあった抗体候補は複数あり、違う抗体を買ってしまった可能性もあります。 最初、2次抗体を蛍光のものを用いたのですが、全体が薄く染まり、特異的なシグナルが見られませんでした。 そこで、ABC染色によりビオチンを介したのですが、本来でるはずのところには見られず、細胞がポツポツと卵胞の周りで染まっているだけでした。 抗体濃度は、データシートのスタート濃度でやっています。 この場合、次に何を試してみればいいでしょうか?? 抗体の賦活化はまだやったことがないので、次やってみようかと思っていますが、今回の結果で特異的に全くでていなかったので望み薄のようですが。。。 シグナルが出ない場合はみなさんはどのようなことを試すのでしょうか? 何か他に書いた方が答えやすいとのアドバイスもあれば、お願いします。
- 免疫染色でシグナルが出ない。。
2種類の別の抗原を認識する抗体で、卵巣を凍結して免疫染色を行いましたが、シグナルがみられません。。 -80℃の2-メチルブタノールで凍結後、切片を作製、アセトン固定後免染を行いました。 免染自体は、みな同じプロトコールなので問題ないと思います。 論文を参考に新しく抗体を買った(その論文では製造会社までしか指定がなく、型番までは不明)ので、失活していることはないはずです。 ただ、論文に書いてあった抗体候補は複数あり、違う抗体を買ってしまった可能性もあります。 最初、2次抗体を蛍光のものを用いたのですが、全体が薄く染まり、特異的なシグナルが見られませんでした。 そこで、ABC染色によりビオチンを介したのですが、本来でるはずのところには見られず、細胞がポツポツと卵胞の周りで染まっているだけでした。 抗体濃度は、データシートのスタート濃度でやっています。 この場合、次に何を試してみればいいでしょうか?? 抗体の賦活化はまだやったことがないので、次やってみようかと思っていますが、今回の結果で特異的に全くでていなかったので望み薄のようですが。。。 シグナルが出ない場合はみなさんはどのようなことを試すのでしょうか? 何か他に書いた方が答えやすいとのアドバイスもあれば、お願いします。
- スターラーバーの扱い方
遺伝子やタンパク質の実験をやっているのですが、スターラーバー(撹拌につかうもの)を素手(ケラチンやDnase、RNaseのコンタミ?)で触るなと先輩にいわれたのですが、洗うときはどうやって洗ったらいいんですか? ピンセットで掴むか手袋をするもんなんですか? また、洗い場に付けている物を実験に使うときを使うときはどうやって取ればいいんですか? 皆さんどうしていますか?
- 締切済み
- 生物学
- 2765express
- 回答数6
- スターラーバーの扱い方
遺伝子やタンパク質の実験をやっているのですが、スターラーバー(撹拌につかうもの)を素手(ケラチンやDnase、RNaseのコンタミ?)で触るなと先輩にいわれたのですが、洗うときはどうやって洗ったらいいんですか? ピンセットで掴むか手袋をするもんなんですか? また、洗い場に付けている物を実験に使うときを使うときはどうやって取ればいいんですか? 皆さんどうしていますか?
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